33d蜜桃成熟时,中文无码一区二区三区在线观看,中文字幕一区二区三区乱码人妻,香蕉久久人人爽人人爽人人片av

您好!歡迎訪問上海牧榮生物科技有限公司網(wǎng)站!
咨詢熱線

17621170138

當(dāng)前位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > ELISA 5種常見問題的解決方案大全

ELISA 5種常見問題的解決方案大全

更新時(shí)間:2023-04-06      點(diǎn)擊次數(shù):748

標(biāo)準(zhǔn)曲線較差

原因

解決方案

標(biāo)準(zhǔn)品溶液配置有誤

確認(rèn)是否進(jìn)行正確稀釋。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)

開蓋前進(jìn)行離心;檢查復(fù)溶后是否存在不溶物。

標(biāo)準(zhǔn)品已降解

按推薦方式保存和處理標(biāo)準(zhǔn)品。

曲線的標(biāo)度不適合

嘗試使用不同標(biāo)度繪制曲線,例如雙對(duì)數(shù)、5 參數(shù)擬合。

移液器加樣誤差

正確使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器


無信號(hào)

原因

解決方案

孵育時(shí)間過短

樣品在 4 ℃ 孵育過夜,或遵循試劑的實(shí)驗(yàn)方案。

靶標(biāo)含量低于檢測(cè)范圍

減小樣品的稀釋倍數(shù)或濃縮樣品。

樣品類型不適用

對(duì)于沒有驗(yàn)證過的樣品類型,檢測(cè)信號(hào)可能減弱或沒有使用驗(yàn)證過的樣品類型作為陽(yáng)性對(duì)照同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

抗原表位被孔板吸附,無法識(shí)別

使用直接或間接 ELISA 方法增強(qiáng)檢測(cè)肽的能力,將肽偶聯(lián)到大的載體蛋白上,然后包被到微量滴定板。

檢測(cè)緩沖液的相容性

確保檢測(cè)緩沖液與靶標(biāo)兼容(例如,保留酶活性、保留蛋白質(zhì)相互作用)。

檢測(cè)試劑不足

遵循試劑的實(shí)驗(yàn)方案,增加檢測(cè)試劑的濃度或用量。

樣品制備不正確

確保進(jìn)行正確的樣品制備/稀釋。樣品可能與微量滴定板測(cè)定形式不兼容。

抗體不足

嘗試不同的抗體濃度/稀釋。

孵育溫度過低

確保在正確溫度下進(jìn)行孵育。所有試劑(包括孔板)在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前應(yīng)處于室溫,或試劑的實(shí)驗(yàn)方案所建議的溫度。

波長(zhǎng)不正確

確認(rèn)波長(zhǎng),再次讀板。

孔板被強(qiáng)力洗滌

檢查并確保自動(dòng)洗滌系統(tǒng)的壓力正確。如果手動(dòng)洗滌,則輕輕吸取沖洗緩沖液。

孔變干

測(cè)定開始后,不要讓孔變干。將所有的孵育步驟使用封口膜或膠帶密封孔板。

酶反應(yīng)的顯色速度慢

使用前配制底物溶液。確保母液未過期、未污染。延長(zhǎng)孵育時(shí)間。


變異系數(shù)(CV)較大 

原因

解決方案

孔中有氣泡

讀板前,確保不存在氣泡。

孔洗滌不均/未充分洗滌

檢查洗板機(jī)的所有管口是否暢通。使用推薦方法進(jìn)行洗滌。

試劑混勻不充分

確保所有試劑充分混勻。

移液量不一致

正確使用經(jīng)過校準(zhǔn)的移液器

邊緣效應(yīng)

確??装搴退性噭┨幱谑覝?。

樣品制備或保存條件不一致

確保樣品制備保持一致,使用合適樣品保存條件(例如盡可能減少反復(fù)凍融)。


背景偏高

原因

解決方案

孔洗滌不充分

按照實(shí)驗(yàn)方案建議進(jìn)行洗滌。

洗滌緩沖液污染

制備新鮮的洗滌緩沖液。

檢測(cè)試劑過多

確保試劑被正確稀釋或者減少檢測(cè)試劑的推薦濃度。

封閉緩沖液無效(例如檢測(cè)試劑結(jié)合封閉劑;孔未封閉)

嘗試不同的封閉劑和/或?qū)⒎忾]劑添加到洗滌緩沖液。

孵育/洗滌緩沖液的鹽濃度

增加鹽濃度可能會(huì)降低非特異性和/或減弱脫靶相互作用。

讀板前加入終止液后時(shí)間太長(zhǎng)

添加終止液后立即讀板。

抗體出現(xiàn)非特異性結(jié)合

使用適當(dāng)?shù)姆忾]緩沖液,例如 BSA 或 5-10% 正常血清,如果是直標(biāo)一抗,使用與一抗種屬相同的血清,如果是非直標(biāo)一抗,則使用與二抗種屬相同的血清。確??滓呀?jīng)過預(yù)處理,以防止非特異性附著。

高抗體濃度

嘗試不同的稀釋度,以獲得好的結(jié)果。

底物孵育在光下進(jìn)行

底物孵育應(yīng)避光進(jìn)行,或根據(jù)試劑的實(shí)驗(yàn)方案建議進(jìn)行。

底物加入后孔中有沉淀生成

增大樣品的稀釋倍數(shù)或降低底物濃度。

孔板臟

清潔孔板底部。


靈敏度偏低

原因

解決方案

ELISA 試劑盒保存不當(dāng)

按推薦方式保存所有試劑。請(qǐng)注意,各試劑的保存條件可能有所不同。

靶標(biāo)不足

濃縮樣品或降低樣品稀釋度。

檢測(cè)試劑失活

確保報(bào)告酶/熒光素具有預(yù)期的活性。

酶標(biāo)儀設(shè)置不正確

在檢測(cè)中,確保酶標(biāo)儀設(shè)置為正確的吸收波長(zhǎng)或激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)。

測(cè)定方法不夠靈敏

更換更靈敏的檢測(cè)系統(tǒng)(例如從比色檢測(cè)轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)發(fā)光/熒光檢測(cè))。更換更靈敏的測(cè)定方法(例如從直接 ELISA 方法轉(zhuǎn)變?yōu)閵A心 ELISA 方法)。延長(zhǎng)孵育時(shí)間或升高溫度。

微量滴定板吸附靶標(biāo)的效果不佳

將靶標(biāo)共價(jià)結(jié)合到微量滴定板。

底物不足

加入更多底物。

樣品類型不兼容(例如血清與細(xì)胞提取物)

對(duì)于沒有驗(yàn)證過的樣品種屬,檢測(cè)信號(hào)可能減弱或沒有。使用驗(yàn)證過的樣品類型作為陽(yáng)性對(duì)照同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。

緩沖液或樣品成分干擾

確認(rèn)試劑中是否存在干擾性化合物。例如,抗體中的die氮化鈉會(huì)抑制 HRP 酶,在血漿中用作抗凝劑的 EDTA 會(huì)抑制酶反應(yīng)。

混合或混用不同試劑盒的試劑

避免混合來自不同試劑盒的試劑。


基質(zhì)效應(yīng)

在使用 ELISA方法對(duì)血漿和血清進(jìn)行定量時(shí),偶爾會(huì)遇到基質(zhì)效應(yīng)所造成的問題。基質(zhì)效應(yīng)可能由多種基質(zhì)組分引起,包括但不限于:內(nèi)源性生物成分之間的相互作用,例如磷脂、碳水化合物和內(nèi)源性代謝物(膽紅素),或目標(biāo)分析物與基質(zhì)之間的相互作用,例如共價(jià)結(jié)合到血漿蛋白。這會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的樣品讀值。

只需將樣品稀釋 2 至 5 倍即可降低基質(zhì)效應(yīng)。稀釋樣品時(shí),注意應(yīng)使用與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的稀釋劑。


掃一掃,關(guān)注微信
地址:上海市嘉定區(qū)安亭鎮(zhèn)新源路155弄16號(hào)新源商務(wù)樓718室 傳真:Shanghai Mulong Biotechnology
©2024 上海牧榮生物科技有限公司 版權(quán)所有 All Rights Reserved.  備案號(hào):滬ICP備2022017655號(hào)-1
亚洲日韩AV一区二区三区中文 | 太深太粗太大太猛太爽了视频| 国产国语videosex另类| 亚洲不卡无码av中文字幕 | 国产精品视频分类精品| 久久国产精品一国产精品| 久久久久久国产精品无码超碰动画| 婷婷夜色| 久久久无码精品午夜| 好男人日本社区www| 91久久久久久波多野高潮| 国产精品对白交换视频| 日木AV无码专区亚洲AV毛片| 午夜天堂av久久久噜噜噜| 篱笆论坛| 成人午夜精品久久久久久久| 国产亚洲婷婷香蕉久久精品| 韩国无遮挡无删减免费软件| 无码国产精品一区二区免费虚拟VR | 天堂在线资源| 国产特级毛片AAAAAAA高清| 精品国产性色无码AV网站| 99热久久是国产免费66| 男女猛烈无遮挡免费视频| 国产末成年女AV片| 涩涩鲁亚洲精品一区二区| 国产欧美亚洲精品第一页| 中文无码热在线视频| 成人午夜剧场| 免费看小12萝裸体视频国产 | 国产女同| 无码一区二区波多野播放搜索| 无码人妻久久一区二区三区免费| 欧美福利在线观看| 亚洲精品久久久久久中文| 中文毛片无遮挡高清免费| 国产免费av片在线无码免费看 | 色综合久久天天综合| 99一国产精品一级毛片| 国产午夜亚洲精品午夜鲁丝片| 大伊香蕉精品一区视频在线|