1、為什么MACS磁珠分選要使用分選柱？

• 磁珠可以更小：美天旎磁珠直徑只有50nm，普通真核細(xì)胞直徑一般大于10um，結(jié)合在細(xì)胞上的磁珠大小可以忽略不計，因此：1、攜帶的磁珠不影響細(xì)胞大小——可以直接上流式檢測，不影響FSC數(shù)據(jù)收集；2、細(xì)胞功能不受影響——分選過程中，磁珠的結(jié)合不會引起細(xì)胞的活化及其它生理狀態(tài)的改變，可以保持細(xì)胞的原始生理和功能狀態(tài)，尤其在Naive免疫細(xì)胞的分選中尤為重要。

• 抗原表位的占據(jù)更少：因為磁場可以被分選柱放大1000-10000倍，所以不需要太多的磁珠結(jié)合即可分離不同細(xì)胞。約20%-30%的抗原表位被偶聯(lián)了磁珠的抗體結(jié)合即可將細(xì)胞滯留在磁場中，這就為后續(xù)實驗預(yù)留了足夠的抗原表位，因此，對于表達(dá)水平不低的抗原來說，MACS磁珠分選后的細(xì)胞可以直接進(jìn)行相關(guān)熒光抗體標(biāo)記，進(jìn)而進(jìn)行流式檢測。

• 細(xì)胞活力更好：通過分選柱引起的間接磁場放大，使得細(xì)胞在磁場中所承受的直接壓力小，讓細(xì)胞受力均勻；同時，通過分選柱放大的磁場可以瞬時變大、離開磁場后磁力又瞬間消失，這些都保證了細(xì)胞所受機(jī)械力小，損傷小，得到的細(xì)胞活力高。

• 細(xì)胞純度更高：通過去除分選柱，可以更好的進(jìn)行去除分選，提高目的細(xì)胞的純度。

2、是不是所有細(xì)胞都要從分選柱上重新獲取？

不是。

若使用陽性分選策略，目的細(xì)胞是磁性標(biāo)記的，在分選器和分選柱產(chǎn)生的磁場中滯留后，當(dāng)分選柱移出分選器，磁場瞬間消失，此時用活塞用力將分選柱中滯留的細(xì)胞推出，從而收集到目的細(xì)胞；

反之，若使用去除分選策略，此時目的細(xì)胞是非磁性標(biāo)記的，可直接從洗脫液中獲得。

3、MACS分選柱有哪幾種，如何選擇合適的分選柱？

MACS分選柱根據(jù)其細(xì)胞容量、用途可以分為幾種：

MS、LS、LD、大細(xì)胞分選柱、全血分選柱、autoMACS分選柱以及用于生物大分子分離的u柱等，選擇分選柱時要根據(jù)您的實驗?zāi)康?、實驗策略和注重的實驗效果來取舍，我們在之前的一期微信“如何選擇恰當(dāng)?shù)姆诌x柱"中有詳細(xì)的說明。

4、MACS分選柱能否重復(fù)使用？

普通的MACS分選柱不建議重復(fù)使用，但autoMACS分選柱分可以重復(fù)使用。

重復(fù)使用不能保證無菌，MACS分選柱都是獨立、無菌包裝的，保證分選下來的細(xì)胞無污染；

分選柱內(nèi)填充了經(jīng)親水包被層處理的鐵珠，如果通過浸泡、洗滌等過程重復(fù)使用，那么，鐵珠表面得親水層被破壞，裸露的鐵珠與細(xì)胞接觸會對流經(jīng)的細(xì)胞產(chǎn)生損失，影響細(xì)胞活力和分選效果。

5、那為什么autoMACS分選柱可以重復(fù)使用呢？

autoMACS分選柱可以在兩周之內(nèi)使用，且最多用100次。

autoMACS分選柱一旦安裝到全自動分選儀上，須保存在液體中，防止分選柱中的填充基質(zhì)被氧化無法使用。

每次使用后應(yīng)該按照推薦程序進(jìn)行沖洗和消毒，以便更好的保存和下一次使用。

6、全血分選柱與普通分選柱有何不同？

全血分選柱有兩層特殊的基質(zhì)，非磁性層和磁性層；普通細(xì)胞分選柱中填充的是均一的親水包被層處理的鐵珠；

全血分選柱柱容量為15ml的全血；

全血分選柱可用于直接從全血中分選細(xì)胞，無需進(jìn)行紅細(xì)胞裂解或者密度梯度離心的過程，無需先制備PBMC。