脫氫酶(DHA)測試盒

微量法100管/96樣

注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

脫氫酶(dehydrogenase, DHA) 是一類催化物質(zhì)氧化還原反應(yīng)的酶，催化底物通過細(xì)胞色素系統(tǒng)被氧化，釋放的能量供機(jī)體使用，是生物體取得能量的一種方式。

測定原理

在細(xì)胞呼吸過程中，氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC）在脫氫酶作用下接受氫以后，被還原為三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），TF呈現(xiàn)紅色，于485nm測定其吸光值，即得脫氫酶活性。

自備實(shí)驗儀器及用品

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、甲醇（不允許快遞，請用戶自備）。

試劑的組成和配制

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存

試劑一：粉劑×1瓶，使用前加10mL試劑二溶解，4℃避光保存（盡量現(xiàn)配現(xiàn)用）。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：甲醇，自備。

樣品處理

1. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

2. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心20min。

3. 液體：直接檢測。

測定步驟和操作表

脫氫酶活力計算

1. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0422x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

酶活單位定義：在37℃時，每mg蛋白樣品每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個酶活性單位。

DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷（Cpr×V樣）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：在37℃時，每克樣品每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個酶活性單位。

DHA（μg/ min /g 鮮重）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T= 0.181×（△A+0.0312）÷W

3. 按液體體積計算

酶活單位定義：在37℃時，每mL樣本每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個酶活性單位。

DHA（μg/ min /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0422×V反總÷V樣÷T= 0.181×（△A+0.0312）

V反總：反應(yīng)總體積，1.1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；T：培養(yǎng)時間，1d=1440min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL。

b. 用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0211x - 0.0312；R2 = 0.9988；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL），y為吸光值。

1.按照蛋白濃度計算

酶活單位定義：在37℃時，每mg蛋白樣品每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個酶活性單位。

DHA（μg/ min / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反總÷（Cpr×V樣）÷T= 0.362×（△A+0.0312）÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：在37℃時，每克樣品每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個酶活性單位。

DHA（μg/ min /g 鮮重）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T= 0.362×（△A+0.0312）÷W

3. 按液體體積計算

酶活單位定義：在37℃時，每mL樣本每min催化產(chǎn)生1μgTF為一個酶活性單位。

DHA（μg/ min /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反總÷V樣÷T= 0.362×（△A+0.0312）

V反總：反應(yīng)總體積，1.1mL；V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；T：培養(yǎng)時間，1d=1440min；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：蛋白濃度，mg/mL。

注意事項：

配制好的試劑一避光保存于4℃，最好在一周內(nèi)使用，若出現(xiàn)紅色，則不能使用。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

脫氫酶(DHA)測試盒